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Millipore 提供了一種用于核酸(suan)應(ying)用轉印(yin)膜(mo)選擇(ze)。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉印(yin)膜(mo)可(ke)以在 Southern blotting，Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實(shi)驗中獲得出(chu)色的結果(guo)。 Immobilon-NC 轉印(yin)膜(mo)，是主要的 Southern 和 colony/plaque 實(shi)驗方案(an)中zui初使用的膜(mo)，也可(ke)作為(wei)一種靈敏度較低但更(geng)經濟的選擇(ze)。
Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉印膜，非常適合于可靠與可重現的轉移、固定、雜交及隨后的重復雜交實驗。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到zui高的靈敏度和zui低的背景信號。 此膜經強化處理具有超長的耐久性，這一點對于重復雜交試驗至關重要。
可提供詳細的實驗方案，在使用 Immobilon-Ny+ 轉印膜時可用于優化轉印結果。
Southern Blotting
直接比較三種(zhong)(zhong)帶正電尼(ni)龍膜在各自(zi)優(you)化實驗方(fang)案下的(de)表現：每種(zhong)(zhong)膜在其推薦的(de)紫(zi)外波長(chang)照射下交聯。 Immobilon-Ny+ 轉印膜的(de)雜交信號是其它兩(liang)種(zhong)(zhong)膜的(de) 2 倍。
12 次(ci)重復(fu)雜交之后的信號強度
尼龍膜在 254 nm 交聯，并進行了多次重復雜交，依次為：用 32P 標記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用 32P 標記探針做第 7 次雜交，然后進行 5 次模擬雜交以及用 32P 標記探針做第 13 次雜交。 在每個雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實雜交*一樣，區別在于未加 32P 標記探針(zhen)。 在整個重復雜交(jiao)過程中，Immobilon-Ny+ 的(de)信號強(qiang)度是競爭產品(pin) A 和 B 的(de)兩(liang)倍(bei)。
檢測靈敏度
將凝(ning)膠(jiao)上 DNA 的(de)量(liang)減少到 0.01 ng。 0.1 lane（條(tiao)帶）中(zhong)的(de) 2.2 和(he) 2.0 kbp 帶分(fen)別與 DNA 的(de) 0.48 和(he) 0.42 pg 相對(dui)應(ying)。 大(da)約相當于 10 µg 人類基(ji)(ji)因組 DNA 中(zhong)一個單拷貝基(ji)(ji)因序列。 可通過對(dui)探(tan)針(zhen)濃度(du)加(jia)倍來提高(gao)靈敏度(du)。 在 0.01 ng 條(tiao)帶中(zhong)，與競爭產品 A 相比，Immobilon-Ny+ 轉(zhuan)印膜靈敏度(du)稍(shao)高(gao)，而背景信(xin)號更低(di)。
用化學發光檢測進行 Northern Blotting
鼠肝的(de)全部 RNA （1 µg） 在甲醛瓊脂糖(tang)凝膠(jiao)中電(dian)泳分離，然(ran)后(hou)通過(guo)毛細作用轉(zhuan)印(yin)到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuan)印(yin)膜和競爭(zheng)產(chan)品(pin)帶正電(dian)尼龍膜 “A”。 與烘(hong)焙相比，通過(guo)紫外交聯固(gu)定RNA 能增強(qiang)信號。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuan)印(yin)膜比競爭(zheng)產(chan)品(pin) A 表(biao)現(xian)出更高的(de)靈敏度(du)。
Colony Lifts
將載有 pUC19 或 pLH2（2.0 kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合細菌懸浮液置于瓊脂培養皿中，在 37°C 下培養過夜。 將培養皿在 4°C 下冷卻30 分鐘，將菌落（直徑大約 1– 2 mm）轉印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上，或轉印至競爭產品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在 254 nm， 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下 交聯。 然后用 a 32P 標(biao)記的(de) DNA 探(tan)針對膜進行雜交，并(bing)使用磷屏成像系統顯色。
Immobilon-NC 轉(zhuan)印(yin)膜(mo)是(shi)一種經濟型選擇，用(yong)于核酸(suan)和(he)蛋(dan)白質印(yin)跡實驗方案。 這種轉(zhuan)印(yin)膜(mo)是(shi) Southern、colony/plaque 以及(ji)蛋(dan)白質實驗方案中zui初使用(yong)的(de)膜(mo)。 NC HATF 所(suo)含(han)(han)的(de)混合(he)纖(xian)(xian)維素酯(zhi)基質，不含(han)(han)在(zai)細胞(bao)生長過(guo)程(cheng)中會干擾細胞(bao)壁完整性(xing)的(de)表面活(huo)性(xing)劑。 這些(xie)膜(mo)用(yong)于 colony lifts。 NC HAHY 所(suo)含(han)(han)的(de)混合(he)纖(xian)(xian)維素酯(zhi)基質，所(suo)帶的(de)表面活(huo)性(xing)劑能(neng)夠增強可濕(shi)性(xing)以及(ji)轉(zhuan)印(yin)過(guo)程(cheng)中的(de)處理能(neng)力。 兩種膜(mo)對核酸(suan)和(he)蛋(dan)白質都(dou)具有高吸附容量。 適用(yong)于常規(gui)轉(zhuan)印(yin)。
訂購信息：
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜直徑，mm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| INYC08250 | 82 | 50 | ||
| INYC08550 | 85 | 50 | ||
| INYC13250 | 132 | 50 | ||
| INYC13750 | 137 | 50 |
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜直徑，mm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| HATF08250 | 82 | 50 | ||
| HATF08550 | 85 | 50 | ||
| HATF13250 | 132 | 50 | ||
| HATF13750 | 137 | 50 |
| 目錄編號 | 濾膜直徑，mm | 數量/包裝 | ||
|---|---|---|---|---|
| HAHY08250 | 82 | 50 | ||
| HAHY08550 | 85 | 50 | ||
| HAHY13750 | 137 | 50 |
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜尺寸，cm x cm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| INYC61150 | 6 x 11 | 50 | ||
| INYC09120 | 9 x 12 | 10 | ||
| INYC10100 | 10 x 10 | 10 | ||
| INYC15150 | 15 x 15 | 10 | ||
| INYC20200 | 20 x 20 | 10 | ||
| INYC22220 | 22.2 x 22.2 | 10 | ||
| INYC2222C | 22.2 x 22.2 | 100 | ||
| INYC26260 | 26 x 26 | 10 | ||
| INYC00010 | 30 x 330 | 1 |
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜尺寸，cm x cm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| HAHY304F0 | 30 x 30 | 10 | ||
| HATF00010 | 33 x 300 | 1 |
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